全身性リウマチ性疾患における抗核抗体検査

Understanding and interpreting antinuclear antibody tests in systemic rheumatic diseases. 

Nat Rev Rheumatol. 2020;16(12):715-726.

 

SLE等の抗核抗体関連リウマチ性疾患を疑った場合、抗核抗体を測定するわけだが、阿蘇の検査法および疾患ごとへの応用についてのレビュー

 

• 抗核抗体検査には間接蛍光抗体法（IIF）とsolid phase immunoassay（SPAs）に分かれる
• IIF…HEp-2細胞を利用した方法＝HEp-2IIFアッセイ
• IIFはかなり検査に手間がかかるため、検者によるばらつきが多く特異性が低い
• 一方でSPAは自動化検査であり、再現性・特異性が高い

 

検査方法

①HEp-2IIF

• 

• HEp-2細胞気質に付着した自己抗体を蛍光染色し、光学顕微鏡で観察することで判定する→判定は手動
• 結果は抗体価と染色パターンに分かれる

②solid phase immunoassay（SPAs）

• 最近導入されつつある方法

• 

• 自己抗体が特定の抗原に付着→ELISA・FRIA法などで、特定の自己抗体が増幅するという仕組み→全自動
• 様々な方法が開発されつつある（PMATなど）

特性

①HEp-2IIF

抗体価と染色パターンに分かれる

1. 抗体価
• 抗核抗体は健常者でも結構な頻度で陽性となるため、IIFによるスクリーニングは完全なものではない
• 40倍で31.7%、80倍で13.3%、160倍で5.0％、320倍で3.3％が健常者で陽性（Arthritis Rheum. 1997;40(9):1601-1611.）

• 

• ただ2019年EULARのSLE基準では80倍で十分感度が高いと判断し、分類基準を作成している
• 参考：

  ctd-gim.hatenablog.com

• 抗体価が高いほど全身性リウマチ性疾患の保有率が高くなることは確か
2. 染色パターン
• speckled, homogeneous, nucleolar, centromereが挙げられる
• どの染色パターンでも抗体価上昇に伴ってリウマチ性疾患有病率は上昇する
• centromereパターンはリウマチ性疾患・特にSScとの関連が深いが、他の染色パターンから特異的抗体の特定はできない→特異的アッセイで確認する必要がある
• ある程度は自動化されているが認識できないパターンもある→経験豊富な技術者による染色パターンの確認が重要

表：HEP2-IIFと特異的抗体

特異的抗体	関連する疾患	HEp-2IIF染色パターン	HEp-2IIF細胞質染色
抗核抗体関連疾患で幅広く発現
ssDNA	特異的疾患なし	陰性が多い	なし
ヒストン	薬剤性ループス SLE、JIA等	Homogenous	なし
SSA/Ro60	Sjögren症候群、SLE	Fine speckled 見落としうる	なし
Ro52(TRIM21)	Sjögren症候群、SLE IIM（炎症性筋疾患）	陰性が多い	なし
U1RNP	SLE、MCTD（混合性結合組織病）	Large/coarse speckled	なし
cN1A	封入体筋炎 Sjögren症候群、SLE	未定義	未定義
SLE
dsDNA	SLE	Homogenous	なし
Nucleosome chromatin	SLE	Homogenous	なし
Sm	SLE	Large/coarse speckled	なし
Ribosomal P	SLE	なし	Dense fine speckled 見落としうる
PCNA	SLE	PCNA様 （pleomorphic speckled）	なし
SSc(全身性強皮症)
トポイソメラーゼⅠ （Scl70）	SSc	Topo I様	なし
CENPB	SSc	Centromere	なし
RNAポリメラーゼⅢ	SSc	Large/coarse speckled	なし
Fibrillarin	SSc	Clumpy nucleolar	なし
Th/To	SSc	Homogeneous nucleolar	なし
Nor90	SSc	Punctate nucleolar	なし
U11/U12 RNP	SSc	Large/coarse speckled	なし
BICD2	SSc	Nucleor	なし
Sjögren症候群
SSB/La	Sjögren症候群	Fine Speckled	なし
オーバーラップ症候群
RuvBL1/2	SScとIIM	Fine Speckled	なし
PM/Scl	SScとIIM	Homogeneous nucleolar + 弱いFine Speckled	なし
Ku	オーバーラップ症候群	Fine Speckled	なし
IIM
Jo-Ⅰ	ARS症候群	なし	Fine speckled 見落としうる
PL7, PL12, OJ, EJ, KS, Ha, Zo	ARS症候群	なし	(Dense) Fine speckled 見落としうる
Mi2	皮膚筋炎	Fine speckled	なし
MDA5	皮膚筋炎	なし	サブセットの細胞内のFine Speckled 見落とされうる
TIF1γ	皮膚筋炎	Fine speckled 見落とされうる	なし
NXP2	皮膚筋炎	Multiple nuclear dots; 見落とされうる	なし
SAE	皮膚筋炎	Fine speckled	なし
SRP	壊死性筋炎	なし	Fine speckled 見落とされうる
HMGCR	壊死性筋炎	なし	ごく少数の細胞でのdine speckled 見落とされうる
その他
DFS70	ANCA関連リウマチ性疾患で稀に見られる	Dense, fine speckled	なし

 ※強皮症・皮膚筋炎の抗体まとめ

ctd-gim.hatenablog.com

ctd-gim.hatenablog.com

②SPA

• ELISA・FEIA・CIAなどの方法があり、抗核抗体関連疾患のスクリーニングではなく特異的自己抗体の検出に利用されている
• ただ、方法ごとで感度・特異度は微妙に異なる
• HEp-2 IIFと比較して感度は低いが、特異度は高い
• 特にSSc・SLEのスクリーニングではIIFの方が感度が高い
• 逆にシェーグレン症候群ではSPAの方が感度高い

 

抗核抗体測定法の組み合わせ

• IIF・SPA両方が陽性の場合、片方のみが陽性の例と比較して抗核抗体関連リウマチ性疾患の活動性が高い→両方行うことで疾患の除外/特定に役立つ
• IIF…感度は高いが、特異度は低い＋特異的自己抗体のはっきりしていないリウマチ性疾患を検出できる可能性がある
• SPA…感度は低いが、特異度は高い＋疾患特異的な自己抗体を検出することができる
• 双方を組み合わせることが重要

 

推奨される検査方法

• 最適なスクリーニング検査は疾患によって異なる

表：疾患ごとの抗核抗体の特定アプローチ

 

疾患	全体的アプローチ	HEp-2IIF染色パターン	SPAで特定された特異的抗体
SLE	IIFは感度は高いが特異度は低い IIFとSPAを組み合わせることに価値がある	Nuclear homogeneous	dsDNA
			Nucleosome or chromatin
		Nuclear fine speckled （見逃されうる）	SSA/Ro60
		Nuclear large/coarse speckled	Sm
			U1RNP
		Cytoplasmic dense fine speckled （見逃されうる）	Ribosomal P
		PCNA様 （pleomorphic speckled）	PCNA
Sjögren症候群	IIFではSSA/Ro60抗体を見逃す可能性がある SPAではSSA/Ro60・SSB/Laの感度が高い →IIFのスクリーニングしなくても良い	Nuclear fine speckled	SSA/Ro60
			SSB/La
全身性強皮症 （SSc）	HEp-2 IIFはスクリーニングに優れている SPAで大半のSSc特異的抗体を検出できるが、全てではない SPAで同定された抗体とIIFパターンが合致しているかを確認することが重要	Centromere	CENPB
		TopoⅠ様	トポイソメラーゼⅠ(Scl-70)
		Nuclear speckled	RNAポリメラーゼⅢ
			U11/U12 RNP
			Ku（オーバーラップ）
			RuvBL1/2 （IIMとオーバーラップ）
		Nucleolar (clumpy, homogeneous or punctate)	Fibrillarin
			Th/To
			PM/Scl（オーバーラップ）
			Nor90
		定義不十分（Speckled）	BICD2
特発性炎症性筋炎 （IIM）	HEp-2の感度は限られている SPAは臨床的に疑わしい場合に測定し、偽陽性があるため注意 全ての抗体スペクトルをカバーしているわけではないので注意 SPAで同定された抗体とIIFパターンが合致しているかを確認することが重要	Cytoplasmic (dense) fine speckled（見逃されうる）	amino-acyl transfer RNA synthetases: Jo1, PL7, PL12, OJ, EJ, KS, Ha or Zo →抗ARS抗体
		Cytoplasmic 細胞のサブセットでのdine speckled （見逃されうる）	HMGCR MDA5
		Nuclear, fine speckled	Mi2
			SAE
			TIF1γ
			Ku（オーバーラップ）
			RuvBL1/2 （SScとオーバーラップ）
		Nuclear multiple dots （見逃されうる）	NXP2
混合性結合組織病 （MCTD）	HEp-2IIFは優れたスクリーニング法である U1RNP高値（SPA）はMCTDを示唆している	Nuclear large/coarse speckled	U1RNP

• 自己免疫性肝炎（AIH）・原発性硬化性胆管炎（PBC）・若年性特発性関節炎（JIA）では診断基準の一部として抗核抗体測定が行われている
• AIH・JIAに関しては標的自己抗原が不明
• PBCでは抗ミトコンドリア抗体が特定されている→ reticular cytoplasmicパターン

 

まとめ

• 抗核抗体測定には大別してHEp-2 IIFとSPAがあり、どちらも一長一短である
• 疑う疾患に応じて検査法を組み合わせることが重要
• SLE・SScではHEp-2 IIFがスクリーニングとして有用
• Sjögren症候群ではSPAがスクリーニングに有用
• IIMではどちらも微妙→特異的抗体測定を行う